能量,引物,光能,染料,分子
提問: 熒光球發光,綠、紅交替閃爍，是何原理？ 問題補充: 医师解答: 這個問題應該放在別的頁面上吧?這里是育嬰的
1．熒光染料
熒光基團通常各自擁有單一的光吸收峰。在光的刺激下，熒光基團吸收光的能量后通常以三種方式釋放出能量：
1) 光能 許多熒光基團吸收光能后仍舊以光能形式釋放能量，并且發射光的峰值大于吸收峰。比如熒光染料Fam的光吸收峰為490nm，而發射峰為530nm。
2) 熱能 某些熒光基團吸收光能后，能量轉換為熱量擴散到環境中，如Dabcyl。
3) 轉移給臨近的分子 當臨近的分子滿足發生能量轉移的要求時，能量從熒光基團傳遞到臨近的分子。
2．熒光共振能量轉移（Fluorescence resonance energy transfer，FRET）
當某個熒光基團的發射譜與另一熒光基團的吸收光譜發生重疊，且兩個基團距離足夠近時，能量可以從短波長（高能量）的熒光基團傳遞到長波長（低能量）的熒光基團，這個過程稱為熒光共振能量轉移,實際相當于將短波長熒光基團釋放的熒光屏蔽。
3．熒光PCR
熒光PCR不同于其他PCR的地方在于PCR過程中利用熒光染料在光刺激下釋放的熒光能量的變化直接反映出PCR擴增產物量的變化，熒光信號變量與擴增產物變量成正比，并通過足夠靈敏的自動化儀器實現對熒光的采集和分析以達到對原始模板量定量的目的。主要有以下幾類：
1) 熒光染料直接結合擴增產物 如SYBB Green I,類似于EB,能特異性地區分單雙鏈DNA,只與雙鏈DNA結合.
2) 熒光標記引物 對引物進行熒光標記從而使熒光標記基團直接摻入PCR擴增產物.
3) 熒光標記探針 常規引物以外，引入熒光基團標記的特異性探針，探針可與模板發生一對一結合關系。
a) Taqman雙標記探針（TaqmanTM 5-nuclease assay）
b) 分子信標探針（Molecular beacon TM）
c) LightCycler TM雜交雙探針
熒光標記探針的最大優點在于其特異性非常強，避免了非特異性擴增造成的假陽性信號。 匹基生物開發的熒光PCR檢測試劑盒主要基于Taqman技術 ： 除常規的一對引物以外，PCR反應體系中另加有一個能與PCR產物雜交的熒光雙標記探針。該探針的5端標記一個熒光基團，3標記另一個熒光基團。此時5端熒光基團吸收能量后將能量轉移給臨近的3’端熒光淬滅基團（發生FRET），因此正常情況下檢測不到該探針5端熒光基團發出的熒光信號
摘自http://biotech.icxo.com/htmlnews/2002/12/04/154674.htm希望可以幫到你
提問: 熒光球發光,綠、紅交替閃爍，是何原理？ 問題補充: 医师解答: 這個問題應該放在別的頁面上吧?這里是育嬰的
1．熒光染料
熒光基團通常各自擁有單一的光吸收峰。在光的刺激下，熒光基團吸收光的能量后通常以三種方式釋放出能量：
1) 光能 許多熒光基團吸收光能后仍舊以光能形式釋放能量，并且發射光的峰值大于吸收峰。比如熒光染料Fam的光吸收峰為490nm，而發射峰為530nm。
2) 熱能 某些熒光基團吸收光能后，能量轉換為熱量擴散到環境中，如Dabcyl。
3) 轉移給臨近的分子 當臨近的分子滿足發生能量轉移的要求時，能量從熒光基團傳遞到臨近的分子。
2．熒光共振能量轉移（Fluorescence resonance energy transfer，FRET）
當某個熒光基團的發射譜與另一熒光基團的吸收光譜發生重疊，且兩個基團距離足夠近時，能量可以從短波長（高能量）的熒光基團傳遞到長波長（低能量）的熒光基團，這個過程稱為熒光共振能量轉移,實際相當于將短波長熒光基團釋放的熒光屏蔽。
3．熒光PCR
熒光PCR不同于其他PCR的地方在于PCR過程中利用熒光染料在光刺激下釋放的熒光能量的變化直接反映出PCR擴增產物量的變化，熒光信號變量與擴增產物變量成正比，并通過足夠靈敏的自動化儀器實現對熒光的采集和分析以達到對原始模板量定量的目的。主要有以下幾類：
1) 熒光染料直接結合擴增產物 如SYBB Green I,類似于EB,能特異性地區分單雙鏈DNA,只與雙鏈DNA結合.
2) 熒光標記引物 對引物進行熒光標記從而使熒光標記基團直接摻入PCR擴增產物.
3) 熒光標記探針 常規引物以外，引入熒光基團標記的特異性探針，探針可與模板發生一對一結合關系。
a) Taqman雙標記探針（TaqmanTM 5-nuclease assay）
b) 分子信標探針（Molecular beacon TM）
c) LightCycler TM雜交雙探針
熒光標記探針的最大優點在于其特異性非常強，避免了非特異性擴增造成的假陽性信號。 匹基生物開發的熒光PCR檢測試劑盒主要基于Taqman技術 ： 除常規的一對引物以外，PCR反應體系中另加有一個能與PCR產物雜交的熒光雙標記探針。該探針的5端標記一個熒光基團，3標記另一個熒光基團。此時5端熒光基團吸收能量后將能量轉移給臨近的3’端熒光淬滅基團（發生FRET），因此正常情況下檢測不到該探針5端熒光基團發出的熒光信號
摘自http://biotech.icxo.com/htmlnews/2002/12/04/154674.htm希望可以幫到你
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